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Western溶液套裝(封閉液、洗滌液、一抗二抗稀釋液)

Western溶液套裝(封閉液、洗滌液、一抗二抗稀釋液)

分類:

免疫印跡檢測系統 - 蛋白檢測

說明書:

AR1201

240元/kit  

WB

WB輔助試劑

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Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號AR1201
    產品名稱Western溶液套裝(封閉液、洗滌液、一抗二抗稀釋液)
    產品規格

    Western封閉液                        100ml

    Western洗滌液                        100ml(10×)

    Western一抗二抗稀釋液           100ml×2  

    按照每次Western blot需要封閉液10ml、一抗稀釋液10ml、二抗稀釋液10ml、洗滌液30ml+30ml+30ml=90ml,約100ml計算,一個包裝的本試劑盒,大約可以進行10次Western Blot檢測。

    保存條件4℃保存,一年有效。 
    產品簡介

           Western溶液套裝是一種包含了Western Blot實驗過程中常用的封閉液、洗滌液、一抗和二抗稀釋液的溶液套裝。

           本產品中的一抗二抗稀釋液可以用于Western時一抗和二抗的稀釋和配制。其主要有效成分為經過反復優化的適量BSA、適當的去垢劑和抗體穩定試劑等,一方面能有效減少一抗二抗的非特異性結合,另一方面能有效提升稀釋后抗體的穩定保存時間。使用本Western一抗二抗稀釋液稀釋的一抗可以在4℃保存和使用不少于六個月,可以反復多次用于Western。經本Western一抗二抗稀釋液稀釋的二抗可以在1-2周內重復使用3-5次。
          本產品中的Western封閉液可以用于Western時轉移了蛋白樣品的PVDF膜或NC膜的封閉。其主要有效成分為經過反復優化的適量BSA和適當的去垢劑等,一方面能有效封閉膜上的蛋白結合位點,另一方面能有效減少后續一抗和二抗的非特異性結合,降低背景,增強信噪比。
          本產品中的Western洗滌液(10X)可以用于Western時一抗或二抗孵育后的洗滌。適當的洗滌可以降低背景,增強信噪比。

    注意事項

    1.取放PVDF膜和NC膜應使用平頭鑷子,并僅輕輕夾取其邊角,操作過程須避免膜表面產生劃痕、折痕或壓痕等痕跡。
    2.PVDF膜一經浸潤和活化,需一直保持濕潤,根據Western進行到的具體步驟可放置于western轉模液或洗滌液等適當溶液中,否則可能會產生難以封閉的異常背景。
    3.為了能使抗體可以反復多次使用,建議盡量在4℃進行一抗和蛋白膜的結合反應,以減緩一抗的衰減速度。
    4.通常在室溫封閉60分鐘即可。如果對于一些背景非常高的抗體,可以4℃封閉過夜。
    5.本Western洗滌液(10X)用蒸餾水稀釋后使用,配制成Western洗滌液(1X)后,宜4℃保存,并在1-2個月內用完,如果室溫保存,宜在1-2周內用完。

    使用說明

    1.Western一抗二抗稀釋液
           a.參考所用的一抗的使用說明,以及樣品中目的蛋白的含量,按照適當比例稀釋一抗,一抗稀釋后即可直接用于Western。一次Western結束后,可以回收稀釋的一抗,4℃保存,以用于下次的Western。

           b.參考所用的二抗的使用說明,以及一抗的質量和樣品中目的蛋白的含量,按照適當比例稀釋二抗,二抗稀釋后即可直接用于Western。一次Western結束后,可以回收稀釋的二抗,4℃保存,以用于下次的Western,通常在1-2周內可以重復使用3-5次。
    2.Western封閉液
    完成轉膜后,用稀釋好的Western洗滌液洗滌膜,共洗滌3次,每次5分鐘,加入Western封閉液,封閉60分鐘,然后進行一抗孵育等后續操作。
    3.Western洗滌液(10X)
           a.取一瓶Western洗滌液(10X),倒入到一潔凈的量筒中,加入蒸餾水混勻并定容到1升后即為Western洗滌液(1X),并可以用于Western的洗滌。沒有用完的洗滌液可以室溫保存,通常1-2周內是可以正常使用的。如果發現洗滌液出現渾濁、沉淀等異常現象,宜廢棄。
           b.在一抗或二抗孵育結束后,加入少量Western洗滌液(1X),使之能蓋住膜,在搖床上洗滌,共洗滌3次,每次5分鐘,然后進行后續的操作。如果按照上述洗滌條件Western結果背景仍然較高,可以適當延長洗滌時間,并增加洗滌次數。通常,延長洗滌時間或增加洗滌次數不會對Western結果產生負面影響。



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