產品中心

當前位置:首頁>產品中心 >免疫印跡檢測系統 >蛋白檢測

Western Blotting DAB 顯色法檢測試劑盒(棕黃色)(兔IgG)

Western Blotting DAB 顯色法檢測試劑盒(棕黃色)(兔IgG)

分類:

免疫印跡檢測系統 - 蛋白檢測

說明書:

LOGO.jpg
  • LOGO.jpg

SA2022

420元/Kit  

WB

WB輔助試劑

現貨

選擇規格:

總價格:

---

選擇數量:

- +

Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號SA2022(適于一抗為兔多克隆抗體)
    價格規格¥420/盒
    工作原理聚合標記法是武漢博士德生物工程有限公司獨創的一種酶標記方法,其敏感性比普通酶標法有明顯提高。用于Western Blotting 的免疫學檢測,更能體現其優點。不僅能大量地節約一抗,更重要的是使條帶更清晰,甚至能檢測出普通酶標法無法檢測出的微量條帶。DAB 是過氧化物酶最重要的顯色劑之一,反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物,適合于免疫印跡的顯色反應。本產品采用特殊配方,具有操作簡單,儲存穩定,信號靈敏度高,持續時間長,背景低,結果易保存等優點。
    保存條件-20℃冷凍保存。DAB 顯色試劑應避光保存。
    有效期一年。
    試劑盒的內容(1)封閉試劑:10 g 蛋白干粉×2 包。
    (2)濃縮抗體稀釋液:20 ml×1 瓶,為10 倍濃縮液。
    (3)聚合過氧化物酶標記山羊抗兔IgG0.2ml,效價1:200-400。親和純化抗體,經聚合法標記過氧化物酶。
    (4)DAB 顯色試劑,含:
    顯色劑A:DAB×40 倍濃縮液,3ml。
    顯色劑B:H2O2×40 倍濃縮液,3ml。
    顯色劑C:×40 倍TBS 濃縮緩沖液,3ml。


Instructions

需要而未提供的試劑和器材:
1. 轉印了蛋白樣品的NC 膜或PVDF 膜:通過SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白質抗原,將PAG 膠上的蛋白質轉印到硝酸纖維素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2. 稀釋緩沖液:使用中性稀釋緩沖液即0.02 M PBS(AR0030)或0.02 M TBS(AR0144)配制封閉液和抗體稀釋液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6):1000 ml 蒸餾水加Na2HPO4 2.8 g ,NaH2PO4 0.4 g,NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸鹽,應加上分子式中水的含量。0.02M TBS (pH7.2-7.6):1000ml 蒸餾水中加Tris 2.42g, NaCl 9g; 純乙酸或濃鹽酸調節pH 值(7.2-7.6)。
3. 洗滌緩沖液:每1000ml 中性稀釋緩沖液中加入0.5 ml Tween20 即可。
4. 一抗:選擇適合的一抗,用抗體稀釋液稀釋相應的一抗,一般特異性抗體工作濃度為1μg/ml, 具體的稀釋度取決于特異性的一抗和膜上的抗原的量。
5. 搖床:膜的封閉、抗體孵育和洗滌都需平穩搖晃,需在搖床上操作。
6. 相機:記錄結果。
操作程序:
1. 通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白樣本和分子量標準。
2. 將蛋白樣本轉移至硝酸纖維素膜或PVDF 膜上。
3. 封閉硝酸纖維膜:用封閉蛋白干粉2 g, 加稀釋緩沖液100 ml,20-37 ℃封閉1-2 小時。用量以浸沒整張膜為準。
4. 用洗滌緩沖液洗滌硝酸纖維素膜5 分鐘, 1 次。
5. 配制抗體稀釋液:取90 ml 稀釋緩沖液加1 g 封閉蛋白干粉和10 ml 濃縮抗體稀釋液即可。一抗、二抗均用此稀釋液稀釋。
6. 硝酸纖維膜孵育一抗:用抗體稀釋液稀釋相應的一抗,一般特異性抗體濃度1μg/ml,20-37 ℃孵育2小時左右。如果缺乏特異性的條帶或陽性不強,應提高一抗的濃度;如果有非特異性的條帶,應提高一抗的稀釋度。
7. 用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維素膜3 次, 每次5 分鐘。
8. 硝酸纖維膜孵育二抗:用抗體稀釋液稀釋相應的酶標二抗,效價1:200-400。37 ℃孵育一個半小時左右。用戶可根據實際染色情況對稀釋度做適當調整。
9. 用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維膜4 次, 每次5 分鐘。
10. DAB 顯色:使用DAB 顯色試劑。按每2 ml 蒸餾水加顯色劑A,B,C 各1滴,混勻。混勻后加至膜上。室溫顯色。一般顯色1-30 分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。顯色后用蒸餾水洗滌以終止反應。
11. 觀察,照相。
備注:可訪問博士德網站獲取詳細的Western blotting 流程及全套產品信息。
注意事項:
1. 試劑頻繁使用時置4℃,不常使用時置-20℃。顯色劑A 需置-20℃冷凍保存。如有結晶析出,應確保結晶完全溶解再行使用。
2. 顯色工作液應新鮮配制。

Related products

暫無相關產品
刘伯温6374cm刘伯温+开奖1